La levure méthylotrophe Pichia pastoris est l’un des systèmes d’expression de protéines recombinantes les plus utilisés, avec des applications allant de l’industrie alimentaire à l’industrie pharmaceutique. Elle est capable de croître en utilisant le méthanol comme seule source de carbone, pour laquelle elle utilise le promoteur alcool oxydase (AOX), un inducteur puissant pour l’expression de protéines recombinantes. L’un des aspects critiques des stratégies d’ajout de méthanol dans ces cultures est le moment de l’induction par le méthanol et l’évitement de son ajout excessif, qui conduit à son accumulation et le rend toxique pour la levure lorsque certaines concentrations sont dépassées dans le milieu. Il existe peu de capteurs de suivi en ligne des niveaux de méthanol au niveau du processus dans les cultures de Pichia, qui puissent également être mis à l’échelle et intégrés au logiciel de contrôle du processus et aux pompes d’ajout de substrat. Dans ce travail, l’évolution de la composition des gaz d’échappement en O₂ et CO₂ a été utilisée comme alternative aux capteurs de méthanol en ligne, principalement selon l’évolution du CO₂ d’échappement, afin d’établir des stratégies optimales pour l’alimentation en méthanol et le moment d’induction. À cet effet, des fermenteurs de paillasse et pilotes Bionet ont été utilisés avec des modules externes pour l’analyse continue de l’O₂ et du CO₂ évacués, intégrés au logiciel de l’équipement. Ce travail préliminaire permettra de mettre en œuvre à l’avenir des contrôles qui optimisent les stratégies d’ajout de substrat dans les processus de fermentation selon une mesure directe du métabolisme cellulaire.
